Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cytochrome c1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426027
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cytochrome c1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico cytochrome c1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cytochrome c1 Antibody (A-5): sc-514435
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cytochrome c1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-426027 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Mouse Cyc1 codifica il citocromo c1, una subunità essenziale del complesso mitocondriale III (ubichinolo–citocromo c reduttasi) che media il trasferimento di elettroni dall’ubichinolo al citocromo c nella membrana mitocondriale interna. Attraverso il suo ruolo nel ciclo Q, il citocromo c1 contribuisce alla generazione della forza proton-motrice che alimenta la sintesi di ATP e sostiene l’omeostasi redox. L’alterazione dei componenti del complesso III può compromettere la fosforilazione ossidativa, aumentare le specie reattive dell’ossigeno e innescare effetti secondari sulla segnalazione dell’apoptosi e sui percorsi di controllo qualità mitocondriale, come la mitofagia. Cyc1 è quindi ampiamente studiato in modelli di disfunzione mitocondriale e stress metabolico che si intrecciano con i meccanismi delle malattie neuromuscolari e neurodegenerative.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cyc1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cyc1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cyc1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cytochrome c1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cyc1 per lo studio della segnalazione di cytochrome c1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cyc1 critici per la funzione di cytochrome c1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cyc1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cyc1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal cytochrome c1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR cytochrome c1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cyc1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cyc1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.