Plásmido Doble Nickase (m) cytochrome c: sc-419891-NIC

Mouse Cycs codifica el citocromo c, una proteína hemo altamente conservada que transfiere electrones entre los complejos III y IV de la cadena respiratoria mitocondrial y sostiene la fosforilación oxidativa y la producción de ATP. Más allá de la bioenergética, el citocromo c participa en la apoptosis intrínseca al promover el ensamblaje del apoptosoma y la activación de caspasas tras la permeabilización de la membrana externa mitocondrial. La función de Cycs se relaciona con la homeostasis mitocondrial, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las respuestas al estrés metabólico que determinan decisiones de supervivencia celular. La señalización desregulada del citocromo c se utiliza ampliamente como lectura molecular en estudios de neurodegeneración, lesión por isquemia–reperfusión, activación de células inmunitarias y metabolismo de células cancerosas.

cytochrome c El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cycs en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cycs. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cycs. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cycs alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.