Plásmido Doble Nickase (m) cytochrome b5: sc-430951-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)cytochrome b5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa cytochrome b5 (m) y el plásmido de doble nickasa cytochrome b5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cyb5a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) cytochrome b5 | sc-430951-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Cyb5a de ratón codifica el citocromo b5, una proteína hemínica asociada a membrana que transfiere electrones a enzimas del citocromo P450, desaturasas de ácidos grasos y sistemas de elongación en el retículo endoplásmico. A través de estas interacciones, el citocromo b5 contribuye al metabolismo oxidativo de xenobióticos y sustratos endógenos, a la biosíntesis de esteroides y lípidos, y a la homeostasis redox. La actividad de Cyb5a puede influir en las respuestas celulares al estrés oxidativo y en el procesamiento metabólico de fármacos y hormonas, vinculándolo con vías relevantes para la función hepática y el equilibrio lipídico sistémico. La alteración de la transferencia de electrones dependiente del citocromo b5 se ha asociado con una desregulación del metabolismo lipídico y con perturbaciones en la oxidación mediada por P450, lo que convierte a Cyb5a en un nodo útil para estudios mecanísticos en modelos metabólicos y toxicológicos.
cytochrome b5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cyb5a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cyb5a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cyb5a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cyb5a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.