Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cystinosin (m): sc-429900

Présentation

Ctns code la cystinosine, un transporteur lysosomal de la cystine couplé au gradient de H+, qui assure l’export de la cystine de la lumière lysosomale vers le cytosol, reliant ainsi le transport lysosomal à l’équilibre rédox cellulaire et à l’homéostasie des acides aminés. La perte d’activité de la cystinosine perturbe la fonction lysosomale, favorise l’accumulation de cystine et modifie des voies impliquées dans la dynamique autophagie–lysosome, les réponses au stress oxydant et l’adaptation métabolique. Dans les modèles murins, l’inactivation de Ctns est largement utilisée pour modéliser les mécanismes à l’origine des phénotypes de stockage de la cystine et pour étudier comment des défauts de transport lysosomal remodèlent la signalisation du stress cellulaire. Ces processus sont pertinents pour comprendre comment les réseaux de trafic et de dégradation centrés sur le lysosome influencent l’homéostasie tissulaire dans des types cellulaires rénaux, oculaires et impliqués dans l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cystinosin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ctns dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ctns, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ctns à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cystinosin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ctns pour l'étude de la signalisation de Cystinosin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ctns essentiels à la fonction de Cystinosin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ctns pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cystinosin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cystinosin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ctns. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cystinosin plasmide HDR (m) et le Cystinosin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ctns pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ctns définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.