CXCR-7 Double Nickase Plasmid (h): sc-403187-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CXCR-7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CXCR-7 Double-Nickase-Plasmid (h) und CXCR-7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACKR3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CXCR-7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CXCR-7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACKR3 kodiert den atypischen Chemokinrezeptor CXCR-7, einen sieben-Transmembran‑GPCR‑ähnlichen Scavenger, der CXCL12 und CXCL11 bindet und vor allem die Verfügbarkeit von Chemokinen moduliert, statt eine klassische Gαi‑Signalübertragung auszulösen. Durch die Formung von CXCL12‑Gradienten und funktionelle Wechselwirkungen mit CXCR4 beeinflusst CXCR-7 Chemotaxis, Programme des Zellüberlebens, die Endothelbiologie und entwicklungsabhängige Zellmigration; nachgeschaltet wirken u. a. Signalwege wie ERK/MAPK sowie β‑Arrestin‑biaste Signalübertragung. Eine veränderte ACKR3/CXCR-7‑Aktivität wird mit fehlregulierter Leukozytenmigration, inflammatorischen Mikroumgebungen, vaskulärem Remodeling sowie Tumorzellmigration und Metastasierung in Verbindung gebracht, weshalb sie häufig als zentraler Knotenpunkt in der Chemokin‑Netzwerkbiologie untersucht wird.
CXCR-7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACKR3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACKR3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACKR3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACKR3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.