Plásmido Doble Nickase (h) CX3CR1: sc-401206-NIC

CX3CR1 codifica un receptor de quimiocinas de siete dominios transmembrana para CX3CL1 (fractalcina), que regula la adhesión de leucocitos, la quimiotaxis y la comunicación célula–célula en contextos inmunitarios y neuroinmunitarios. Tras la unión del ligando, CX3CR1 se acopla a la señalización dependiente de Gαi para modular vías posteriores, como PI3K–AKT, MAPK/ERK, el flujo de calcio y la remodelación del citoesqueleto, que determinan la migración y la supervivencia celular. Es especialmente relevante para el tráfico de monocitos/macrófagos, la biología de la microglía y las interacciones vasculares–inmunes que influyen en las respuestas inflamatorias tisulares. La señalización desregulada de CX3CR1 y las alteraciones asociadas a variantes se han estudiado en afecciones que implican inflamación crónica y neuroinflamación, incluidos procesos ateroscleróticos y mecanismos de enfermedades neurodegenerativas.

CX3CR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CX3CR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CX3CR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CX3CR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CX3CR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.