CUL-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416925

Panoramica

CUL3 codifica la cullina-3 (CUL-3), un’impalcatura centrale dei complessi E3 ubiquitina ligasi CUL3–RBX1, che reclutano proteine adattatrici con dominio BTB per conferire specificità di substrato all’ubiquitinazione e alla successiva degradazione proteasomiale. Attraverso la degradazione regolata di bersagli coinvolti nell’omeostasi redox, nel controllo del ciclo cellulare, nella dinamica del citoscheletro e nella segnalazione dello stress, CUL-3 contribuisce a coordinare vie come la funzione ubiquitina–proteasoma e le risposte allo stress ossidativo mediate da NRF2/KEAP1. L’alterazione dell’ubiquitinazione dipendente da CUL3 può compromettere la proteostasi e le reti di segnalazione che influenzano infiammazione, metabolismo e integrità del genoma. Un’attività di CUL3 deregolata e interazioni alterate con gli adattatori sono state collegate in letteratura a vie associate al cancro e a meccanismi di malattie cardiovascolari e del neurosviluppo, a supporto della sua utilità come nodo per la dissezione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CUL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CUL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CUL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CUL-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CUL3 per lo studio della segnalazione di CUL-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CUL3 critici per la funzione di CUL-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CUL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CUL-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CUL-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CUL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CUL-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CUL-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CUL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CUL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.