Plasmide Double Nickase (h) CtIP: sc-401292-NIC

RBBP8 code CtIP, un facteur conservé de résection des extrémités de l’ADN qui coordonne l’initiation de la recombinaison homologue en favorisant le traitement 5′→3′ des cassures double brin et en facilitant le chargement de RAD51. CtIP agit à l’interface entre la signalisation des dommages à l’ADN et le contrôle du cycle cellulaire, en s’intégrant aux voies dépendantes de BRCA1 et du complexe MRN pour réguler l’activation des points de contrôle, la stabilité des fourches de réplication et le choix de la voie de réparation entre la recombinaison homologue et les voies alternatives de jonction des extrémités. Par son rôle dans le maintien de l’intégrité du génome, une activité altérée de CtIP est associée à l’instabilité chromosomique et a été étudiée dans le contexte de la biologie des cancers et des réseaux de suppresseurs de tumeurs. La résection dépendante de CtIP influence également la recombinaison de commutation de classe et d’autres processus de cassures programmées de l’ADN, faisant de RBBP8 un nœud clé pour l’étude de la fidélité de réparation et de la mutagenèse.

CtIP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RBBP8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RBBP8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RBBP8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RBBP8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.