CTAGE5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406164

Übersicht

CTAGE5 (auch bekannt als MIA2) kodiert eine membranassoziierte Komponente der ER-Exportmaschinerie, die den COPII-abhängigen Transport und die Organisation von ER-Austrittsstellen unterstützt. Durch die Koordination der Frachtbeladung und Vesikelbildung trägt CTAGE5 zu einer effizienten Sekretion und zur Aufrechterhaltung der Proteostase im ER bei – Prozesse, die eng mit der „unfolded protein response“ (UPR) und der ER-Stress-Signalgebung verknüpft sind. Eine Störung der CTAGE5-Funktion kann den Durchsatz des sekretorischen Wegs verändern, die intrazelluläre Proteinverarbeitung beeinflussen und zelluläre Antworten auf metabolischen oder inflammatorischen Stress umgestalten. In der Humanbiologie werden diese Signalwege häufig in Kontexten untersucht, in denen sekretorische Kapazität und ER-Homöostase krankheitsrelevante Phänotypen beeinflussen, einschließlich der Anpassung von Tumorzellen und immunbezogener Signalgebung.

Das CTAGE5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MIA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MIA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MIA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CTAGE5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MIA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CTAGE5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MIA2-Exone abzielen, die für die CTAGE5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MIA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CTAGE5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CTAGE5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MIA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CTAGE5 HDR-Plasmid (h) und CTAGE5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MIA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MIA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.