Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CRX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419817
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRX Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CRX, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRX Antibody (A-9): sc-377138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419817 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Crx codifica il fattore di trascrizione cone-rod homeobox (CRX), un regolatore maestro della differenziazione e del mantenimento dei fotorecettori nella retina del topo. CRX si lega a elementi cis-regolatori per guidare l’espressione dei geni necessari per la fototrasduzione, la biogenesi del segmento esterno e la funzione sinaptica, integrando reti trascrizionali con altri fattori di linea retinica. L’alterazione dei programmi genici dipendenti da CRX compromette la maturazione e la sopravvivenza di bastoncelli e coni, collegando questa via a fenotipi di degenerazione retinica ereditaria. Di conseguenza, Crx è ampiamente studiato per comprendere i meccanismi dello sviluppo retinico, la regolazione genica dei fotorecettori e le relazioni genotipo–fenotipo nei modelli di malattia del sistema visivo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRX (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crx in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crx insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crx a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRX.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crx per lo studio della segnalazione di CRX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Crx critici per la funzione di CRX
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crx per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CRX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CRX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crx. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CRX Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CRX (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crx per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crx definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.