Crossveinless-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406614

Panoramica

BMPER codifica la glicoproteina secreta della matrice extracellulare Crossveinless-2, un regolatore dipendente dal contesto della segnalazione delle proteine morfogenetiche dell’osso (BMP). Legando i ligandi BMP e modulandone la disponibilità per i recettori BMP, BMPER influenza programmi trascrizionali dipendenti da SMAD che controllano il comportamento endoteliale, la morfogenesi tissutale e il rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività di BMPER si interseca con vie dello sviluppo e dell’omeostasi vascolare ed è stata associata in letteratura, quando alterata, a una disregolazione della segnalazione angiogenica e a fenotipi del tessuto connettivo. Queste proprietà rendono BMPER un bersaglio utile per studiare la formazione dei gradienti BMP, il sequestro dei ligandi e la fine regolazione della via in modelli cellulari e di organoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Crossveinless-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BMPER in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BMPER insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BMPER a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Crossveinless-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BMPER per lo studio della segnalazione di Crossveinless-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BMPER critici per la funzione di Crossveinless-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BMPER per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Crossveinless-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Crossveinless-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BMPER. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Crossveinless-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Crossveinless-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BMPER per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BMPER definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.