CRBP I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402675-ACT

RBP1 codifica a proteína 1 de ligação ao retinol celular (CRBP I), um transportador citosólico que se liga ao retinol e regula o seu tráfego intracelular, armazenamento e conversão metabólica. Ao controlar a entrega de retinol às desidrogenases de retinol e à maquinaria de esterificação de retinil, a CRBP I influencia a homeostase dos retinoides e programas transcricionais a jusante dependentes do ácido retinoico, que moldam a diferenciação epitelial, o desenvolvimento e a regulação metabólica. Alterações na expressão de RBP1 têm sido associadas a sinalização de retinoides perturbada em contextos como transformação epitelial, fibrose e desregulação metabólica, tornando-o um nó útil para estudar a biologia da vitamina A e o controlo transcricional. Em células humanas, a CRBP I oferece uma forma acessível de investigar como a disponibilidade de retinoides se acopla a vias de recetores nucleares e a transições de estado celular.

CRBP I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRBP I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRBP I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRBP I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRBP I em células tumorais com expressão de RBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.