CPTI-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419787

概要

Cpt1b は、カルニチン・パルミトイルトランスフェラーゼ1（CPTI-M）の筋肉型アイソフォームをコードする遺伝子であり、アシルカルニチンを生成することで長鎖脂肪酸のミトコンドリアへの取り込みを制御するミトコンドリア外膜酵素です。ミトコンドリアβ酸化の律速段階として、CPTI-M は脂質利用を細胞のエネルギー恒常性と結び付け、マロニルCoAによる調節、AMPKシグナル伝達、さらにPPARにより駆動される広範な代謝プログラムと機能的に相互作用します。酸化需要の高いマウス組織では、Cpt1b 活性が燃料選択、ミトコンドリア機能、脂質の分配（パーティショニング）を規定します。CPTI-M 依存的フラックスの変化は、代謝機能障害、インスリン感受性、脂質関連ミオパチーや心代謝表現型との関連で、しばしば研究対象となります。

CPTI-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCpt1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cpt1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cpt1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CPTI-Mタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CPTI-Mシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cpt1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CPTI-Mの機能に不可欠なCpt1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cpt1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CPTI-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCPTI-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cpt1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CPTI-M HDRプラスミド（m）および CPTI-M HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCpt1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCpt1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。