Plasmide CRISPR d'Activation (h) CPS1: sc-402014-ACT

Le gène humain **CPS1** code la carbamoyl‑phosphate synthétase 1, une enzyme mitochondriale qui catalyse la première étape engagée du cycle de l’urée en convertissant l’ammoniac et le bicarbonate en carbamoyl‑phosphate à l’aide de l’ATP. Cette activité est centrale pour l’élimination hépatique de l’azote et s’articule avec le catabolisme des acides aminés, le métabolisme mitochondrial et la biosynthèse en aval de l’arginine. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CPS1 sont associées à l’hyperammoniémie et à une dysrégulation métabolique plus large, et le statut de CPS1 est fréquemment évalué dans des études portant sur la physiologie hépatique, les réponses au stress mitochondrial et l’équilibre azoté. En recherche sur le cancer et le métabolisme, CPS1 est également utilisé comme marqueur dépendant du contexte de reprogrammation métabolique et d’activité du cycle de l’urée associée à une lignée cellulaire.

CPS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CPS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CPS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CPS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CPS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CPS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CPS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CPS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CPS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CPS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.