Plasmide Double Nickase (h) COX5b: sc-405159-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COX5b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COX5b Double Nickase (h) et le plasmide COX5b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COX5B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COX5b Antibody (C-5): sc-374416
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COX5b | sc-405159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COX5b | sc-405159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX5B code la sous-unité 5B de la cytochrome c oxydase (COX5b), un composant du complexe IV mitochondrial codé par le noyau, qui contribue à réguler le transfert d’électrons du cytochrome c vers l’oxygène et à soutenir une phosphorylation oxydative efficace. En participant au pompage des protons et au maintien du potentiel de membrane mitochondrial, COX5b influence la production d’ATP, l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène et l’adaptation métabolique selon les conditions d’oxygène et de nutriments disponibles. La fonction de COX5B s’inscrit aussi dans les voies de biogenèse et de contrôle qualité des mitochondries, notamment l’assemblage de la chaîne respiratoire et la mitophagie, qui sont au cœur des réponses cellulaires au stress. Des altérations de l’activité du complexe IV et une dysfonction mitochondriale associée à COX5B ont été liées à des défauts bioénergétiques observés dans divers contextes pathologiques, y compris des phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs, où la performance mitochondriale conditionne la survie et la différenciation cellulaires.
COX5b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COX5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COX5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COX5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COX5B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.