Plasmide CRISPR d'Activation (h) COX4: sc-400616-ACT

COX4I1 humain code la sous-unité IV de la cytochrome c oxydase, isoforme 1 (COX4), un composant structurel du complexe IV mitochondrial codé par le noyau, qui contribue à réguler le transfert d’électrons du cytochrome c vers l’oxygène moléculaire et soutient la phosphorylation oxydative. En modulant l’activité du complexe IV, COX4 participe au maintien du potentiel de membrane mitochondrial, à la production d’ATP et à l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène, s’intégrant à des programmes bioénergétiques et de réponse au stress plus larges. L’expression de COX4I1 et la stœchiométrie du complexe IV sont fréquemment évaluées dans des études portant sur la dysfonction mitochondriale, l’adaptation à l’hypoxie et la reprogrammation métabolique qui accompagnent des états pathologiques prolifératifs et dégénératifs. En tant que marqueur central de l’intégrité de la chaîne respiratoire, COX4 est couramment utilisé pour relier des modifications de la biogenèse mitochondriale et de la protéostasie à des altérations du métabolisme cellulaire.

COX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COX4I1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COX4I1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COX4I1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COX4I1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de COX4I1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.