COP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402776-ACT

RFWD2はCOP1をコードしており、COP1はRING型のE3ユビキチンリガーゼとして、複数のシグナル伝達因子や転写制御因子のユビキチン化とプロテアソーム分解を触媒することで、タンパク質の安定性を制御します。COP1は、経路エフェクターの量と活性を調節することにより、DNA損傷応答、細胞周期の進行、ストレス適応性の転写などを含む細胞プログラムに影響を与えます。ユビキチン依存的なプロテオスタシス制御を介して、COP1はがん化シグナル、分化、細胞恒常性に関わる転写ネットワークを再編成し得ます。COP1の発現や活性の異常は、腫瘍抑制因子とオンコジーンのバランスの変化と関連づけられており、RFWD2はユビキチン経路に関連する疾患生物学の機序研究に有用な結節点となります。

COP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RFWD2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RFWD2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRFWD2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRFWD2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRFWD2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。