Plásmido Doble Nickase (h) connexin 40: sc-401031-NIC

GJA5 codifica la conexina 40 (Cx40), una subunidad de canal de uniones gap que forma conductos intercelulares para el acoplamiento eléctrico y metabólico a través de conexones en la membrana plasmática. En tejidos humanos, la Cx40 destaca en el endotelio vascular y en el sistema de conducción cardíaco, donde favorece la propagación coordinada de señales y contribuye a la homeostasis tisular. La conexina 40 participa en el ensamblaje y recambio de las uniones gap, la comunicación célula–célula y la regulación del tono vascular y la velocidad de conducción. La desregulación de la expresión de GJA5 o de la función de los canales de conexina se ha asociado con fenotipos cardiovasculares, incluidas anomalías de la conducción auricular y mayor susceptibilidad a arritmias, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de la electrofisiología y la señalización endotelial.

connexin 40 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJA5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.