Complexin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406799

Visão geral

O CPLX2 codifica a complexina-2, uma proteína citosólica pré-sináptica que se liga a complexos SNARE montados para regular o preparo (priming) de vesículas sinápticas e a exocitose desencadeada por cálcio. Ao modular a probabilidade de fusão das vesículas e a liberação síncrona de neurotransmissores, a complexina-2 contribui para a neurotransmissão dependente de atividade e para a plasticidade sináptica de curto prazo. Disfunções ligadas ao CPLX2 têm sido investigadas no contexto de alterações no equilíbrio excitatório/inibitório e de fenótipos em nível de circuitos relevantes para transtornos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, bem como de alterações sinápticas associadas à neurodegeneração. Essas características tornam o CPLX2 um alvo útil para dissecar a fusão de membranas mediada por SNARE, a sinalização dependente de Ca2+ e o controle do ciclo de vesículas pré-sinápticas em modelos celulares humanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Complexin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CPLX2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CPLX2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CPLX2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Complexin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CPLX2 para a investigação da sinalização de Complexin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CPLX2 críticos para a função Complexin-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CPLX2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Complexin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Complexin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CPLX2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Complexin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Complexin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CPLX2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CPLX2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.