Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL17A1 (m): sc-419738

Présentation

Col17a1 code le collagène de type XVII chaîne alpha 1 (COL17A1), un collagène transmembranaire et un composant central des hémidesmosomes, qui ancre les kératinocytes basaux à la membrane basale sous-jacente. COL17A1 interagit avec la laminine-332 et des complexes d’intégrines pour soutenir l’adhésion épidermique, l’organisation de la membrane basale et l’homéostasie des annexes cutanées, et son clivage régulé de l’ectodomaine influence la migration des kératinocytes et le remodelage associé aux plaies. Dans les tissus murins, COL17A1 contribue à l’intégrité épithéliale et à la mécanotransduction à la jonction dermo-épidermique, en reliant les signaux de la matrice extracellulaire à la stabilité du cytosquelette. L’altération de la fonction de COL17A1 est largement pertinente pour l’étude de la fragilité cutanée, des phénotypes bulleux, du cycle du follicule pileux et des défauts de barrière épithéliale associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL17A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Col17a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Col17a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Col17a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL17A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Col17a1 pour l'étude de la signalisation de COL17A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Col17a1 essentiels à la fonction de COL17A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Col17a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL17A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le COL17A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Col17a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL17A1 plasmide HDR (m) et le COL17A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Col17a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Col17a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.