CNPase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402463-ACT

ヒトのCNP遺伝子は、2′,3′-環状ヌクレオチド3′-ホスホジエステラーゼ（CNPase）をコードしており、CNPaseはミエリンに関連する豊富な酵素として、オリゴデンドロサイトの成熟、ミエリン鞘の維持、ならびに細胞骨格の組織化に関与すると考えられています。CNPaseは2′,3′-環状ヌクレオチドを加水分解し、RNA関連プロセスや膜―細胞骨格相互作用にも関与することで、グリア突起の伸長や軸索―グリア間カップリングに影響を及ぼします。CNPの発現や活性の変化は、脱髄表現型や神経炎症の状況と関連づけられており、白質の健全性や神経回路の結合性を研究するうえで重要です。グリアに富むマーカーとして、CNPaseはミエリン化を制御する経路、オリゴデンドロサイトのストレス応答、そしてミエリン不安定性の基盤となる機構の解析にしばしば用いられます。

CNPase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CNPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CNPase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CNP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCNP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CNPaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCNP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCNPase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCNP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCNPase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。