CMAS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409575

Descripción general

CMAS codifica la citidina monofosfato N-acetilneuramínico ácido sintasa, una enzima nuclear que cataliza la conversión de Neu5Ac a CMP-Neu5Ac, el sustrato donador activado necesario para las reacciones de sialilación en el aparato de Golgi. Al controlar la disponibilidad de CMP–ácido siálico, CMAS influye en la sialilación de glicoproteínas y glicolípidos, afectando las interacciones célula–célula, la señalización de receptores, el reconocimiento inmunitario y la estabilidad de proteínas en la membrana plasmática. La actividad de CMAS conecta el metabolismo central de carbohidratos con la biosíntesis de glicoconjugados dentro de la vía del ácido siálico y de redes más amplias de glicosilación. Los patrones de sialilación alterados asociados a una función desregulada de CMAS son relevantes para estudios de trastornos congénitos de la glicosilación, fenotipos del neurodesarrollo y remodelación de la superficie celular en cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CMAS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CMAS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CMAS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CMAS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CMAS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CMAS para la investigación de la señalización de CMAS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CMAS críticos para la función de CMAS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CMAS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CMAS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CMAS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CMAS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CMAS (h) y el plásmido HDR CMAS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CMAS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CMAS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.