CLPTM1 Double Nickase Plasmid (m): sc-425178-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLPTM1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLPTM1 Double-Nickase-Plasmid (m) und CLPTM1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Clptm1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLPTM1: sc-374619
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLPTM1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425178-NIC | 20 µg | $410.00 |
Clptm1 kodiert CLPTM1, ein mehrfach membranspannendes Transmembranprotein, das überwiegend an intrazellulären Membranen lokalisiert ist, darunter dem endoplasmatischen Retikulum, wo es vermutlich zum Transport von Membranproteinen und zu zellulären Stressantworten beiträgt. In Maus- und anderen Säugetiersystemen wurde CLPTM1 mit der Regulation der Oberflächenexpression von Rezeptoren und Ionenkanälen in Verbindung gebracht, was auf eine Rolle bei Prozessen wie synaptischer Signalübertragung und zellulärer Anpassung an proteostatische Belastungen hindeutet. Eine veränderte CLPTM1-Expression wurde in mehreren Modellkontexten mit krebsassoziierten Phänotypen und Signalwegen der Medikamentenantwort assoziiert, was die Untersuchung seiner Funktionen in Überlebenssignalen und der zellulären Empfindlichkeit gegenüber Stressoren unterstützt. Funktionelle Studien konzentrieren sich häufig darauf, wie CLPTM1 die Membranorganisation, den Transport und nachgeschaltete Signalnetzwerke beeinflusst, die für neurologische und onkogene Biologie relevant sind.
CLPTM1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Clptm1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Clptm1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Clptm1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Clptm1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.