CLCA1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402998-NIC

CLCA1（chloride channel accessory 1）は、分泌型および膜関連型の糖タンパク質をコードし、特に消化管および気道粘膜において、上皮の塩化物イオン伝導と粘液の生理機能を調節します。CLCA1は杯細胞分化やムチン産生の制御と関連づけられることが多く、バリア機能を形作る炎症反応や上皮リモデリングのプログラムと統合的に関与します。CLCA1の発現変化は、粘膜の炎症状態や上皮性悪性腫瘍で観察されており、分化状態や分泌系譜の構成変化を示すマーカーとして用いられることが少なくありません。これらの特性により、CLCA1は上皮のイオン輸送調節、粘液恒常性、ならびに炎症に関連した転写ネットワークを研究するうえで有用な標的となります。

CLCA1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CLCA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CLCA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CLCA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CLCA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。