CLC-7 Double Nickase Plasmid (h): sc-404550-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLC-7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLC-7 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLC-7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLCN7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLC-7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404550-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLC-7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404550-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TCF19 (Transkriptionsfaktor 19) kodiert TCF-19, ein nukleäres DNA-bindendes Protein, das in proliferierenden Zellen angereichert ist und mit Programmen der Transkriptionskontrolle in Verbindung steht, die das Fortschreiten des Zellzyklus koordinieren. Es wurde mit der Regulation von Genen assoziiert, die an der DNA-Replikation und dem Eintritt in die S‑Phase beteiligt sind, und unterstützt Signalwege, die Chromatindynamik mit Wachstumssignalen koppeln. Eine veränderte TCF19-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird zudem durch genetische und funktionelle Studien mit immunologischen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich einer Anfälligkeit für Autoimmunerkrankungen. Diese Zusammenhänge machen TCF-19 zu einem nützlichen Ziel, um Transkriptionsnetzwerke zu untersuchen, die Proliferation, Genomstabilität und inflammatorische Signalgebung beeinflussen.
CLC-7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLCN7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLCN7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLCN7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLCN7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.