CLC-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405938

概要

CLCN6は、細胞内の塩化物／プロトン交換輸送体であるCLC-6をコードしている。CLC-6はCLCファミリーの一員で、主にエンドソームおよびリソソーム膜に局在し、小胞内のイオン恒常性の維持に寄与する。CLC-6は塩化物輸送をプロトン勾配と共役させることで、エンドソーム成熟、リソソームの酸性化、ならびにタンパク質の選別や分解・代謝回転に影響する膜輸送過程の制御に関与すると考えられている。これらの経路が破綻すると、神経細胞や上皮細胞の生理機能が変化し得るほか、ヒト研究ではCLCN6の遺伝的多様性が神経発達表現型や、より広範なリソソーム関連機能障害と関連することが報告されている。そのため、CLCN6はエンドリソソーム生物学、カーゴ再循環、ならびにオルガネラpHやイオンバランスの変化に結び付く細胞ストレス応答の文脈で、しばしば研究対象となる。

CLC-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLCN6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLCN6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLCN6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLC-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLC-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLCN6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLC-6の機能に不可欠なCLCN6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLCN6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLC-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCLC-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLCN6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLC-6 HDRプラスミド（h）および CLC-6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLCN6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLCN6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。