Plásmido Doble Nickase (h) Clathrin Light Chain A/CLTA: sc-403962-NIC

CLTA codifica la cadena ligera A de clatrina, un componente central de las vesículas recubiertas de clatrina que modula el ensamblaje y la dinámica de la red de clatrina junto con la cadena pesada de clatrina durante la endocitosis. CLTA contribuye a la internalización mediada por receptores, al reciclaje de vesículas sinápticas y al tráfico entre la membrana plasmática, los endosomas y la red trans-Golgi, lo que la vincula con vías que controlan la composición de la membrana y la atenuación de la señalización. A través de su papel en la clasificación de la carga y el direccionamiento endosomal, CLTA influye en el recambio de receptores como los receptores de factores de crecimiento y los receptores inmunitarios, modelando la señalización aguas abajo y la homeostasis celular. La desregulación del tráfico mediado por clatrina se ha asociado con procesos neurodegenerativos, alteraciones en la señalización metabólica y cambios relevantes para el cáncer en el reciclaje de receptores y la captación de nutrientes, lo que convierte a CLTA en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología de vesículas.

Clathrin Light Chain A/CLTA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLTA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLTA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLTA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLTA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.