CKIP-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403898-ACT

PLEKHO1は、カゼインキナーゼ2相互作用タンパク質1（CKIP-1）をコードしている。CKIP-1はプレクストリン相同（PH）ドメインを含むアダプタータンパク質で、細胞膜に局在し、シグナル伝達やタンパク質のターンオーバーを制御するタンパク質間相互作用の調整に関与する。CKIP-1は、E3リガーゼやホスファターゼとの相互作用を介してAkt/PI3Kシグナルやユビキチン依存的プロセスの制御に関連づけられており、その結果として細胞増殖、分化、ならびに細胞骨格の編成に影響を及ぼす。骨生物学の分野では、CKIP-1は骨芽細胞機能および骨形成経路への関与が示唆されている一方、より広い研究では、PLEKHO1発現の変化が、がんや炎症の文脈で重要となる増殖やストレス応答プログラムの変動と関連することが報告されている。これらの特徴により、PLEKHO1は、組織恒常性の基盤となる膜近傍のシグナル伝達ネットワークおよび転写プログラムを解明するための有用な標的となる。

CKIP-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLEKHO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CKIP-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLEKHO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLEKHO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CKIP-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLEKHO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCKIP-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLEKHO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCKIP-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。