CIP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406095

Panoramica

TRIP10 codifica per la Cdc42-interacting protein 4 (CIP4), una proteina adattatrice con domini F-BAR/SH3 che collega il riconoscimento della curvatura di membrana al rimodellamento del citoscheletro di actina. CIP4 coopera con Cdc42, dinamina e N-WASP per coordinare l’endocitosi mediata da clatrina, il traffico vescicolare e l’assemblaggio dell’actina corticale, influenzando così l’internalizzazione dei recettori e l’attenuazione del segnale. Attraverso queste funzioni, CIP4 contribuisce a processi quali polarità cellulare, migrazione e dinamica di protrusioni tipo invadopodi, collegandosi a vie che regolano l’organizzazione del citoscheletro e il rimodellamento di membrana. Un’attività deregolata di TRIP10/CIP4 è stata studiata nel contesto di motilità cellulare aberrante e programmi di segnalazione rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi che coinvolgono alterazioni delle reti endocitiche e dell’actina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CIP4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIP10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIP10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIP10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CIP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIP10 per lo studio della segnalazione di CIP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRIP10 critici per la funzione di CIP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIP10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CIP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIP10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CIP4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CIP4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIP10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIP10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.