Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cHMGCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417181
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cHMGCS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico cHMGCS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cHMGCS Antibody (A-6): sc-166763
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cHMGCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417181 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
HMGCS1 codifica la 3-idrossi-3-metilglutaril-CoA sintasi citosolica (cHMGCS), un enzima chiave della via del mevalonato che catalizza la formazione di HMG-CoA a partire da acetoacetil-CoA e acetil-CoA. Questo passaggio sostiene la biosintesi di steroli e isoprenoidi, collegando la disponibilità cellulare di acetil-CoA alla produzione di colesterolo e alla segnalazione dipendente dalla prenilazione. L’attività di HMGCS1 è strettamente integrata nei programmi di omeostasi lipidica e nella regolazione a feedback dell’espressione dei geni metabolici, influenzando la biogenesi delle membrane e l’equilibrio redox. La disregolazione del flusso della via del mevalonato è stata associata ad alterazioni della proliferazione, delle risposte allo stress metabolico e a fenotipi rilevanti per la ricerca sulle malattie cardiovascolari e neurodegenerative.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cHMGCS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HMGCS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HMGCS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HMGCS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cHMGCS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HMGCS1 per lo studio della segnalazione di cHMGCS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni HMGCS1 critici per la funzione di cHMGCS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HMGCS1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal cHMGCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cHMGCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HMGCS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal cHMGCS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cHMGCS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HMGCS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HMGCS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.