CHD8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426734

Visão geral

Chd8 codifica a proteína de ligação ao DNA helicase com domínio cromado 8 (CHD8), um remodelador de cromatina dependente de ATP que regula o posicionamento de nucleossomos e programas transcricionais durante o desenvolvimento. A CHD8 influencia a acessibilidade de enhancers e promotores, conectando a arquitetura da cromatina ao controle do ciclo celular, à diferenciação neuronal e a saídas transcricionais associadas à via Wnt/β-catenina. Em sistemas murinos, Chd8 é amplamente utilizado para investigar mecanismos de neurodesenvolvimento e redes de regulação gênica, já que alterações na dosagem de CHD8 têm sido associadas à biologia relacionada ao transtorno do espectro autista em estudos genéticos e funcionais. Essas propriedades fazem da CHD8 um nó-chave para o estudo do controle, mediado pela cromatina, da especificação de linhagem e da homeostase transcricional.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CHD8 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Chd8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Chd8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Chd8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CHD8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Chd8 para a investigação da sinalização de CHD8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Chd8 críticos para a função CHD8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Chd8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CHD8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CHD8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Chd8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CHD8 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CHD8 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Chd8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Chd8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.