Plásmido Doble Nickase (h) CFTR: sc-400653-NIC

CFTR codifica el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística, un canal iónico de la familia de los transportadores ABC (ATP-binding cassette) regulado por cAMP/PKA, que conduce cloruro y bicarbonato a través de las membranas epiteliales. La actividad de CFTR coordina la secreción de líquidos transepitelial, la hidratación de la superficie de las vías respiratorias y el aclaramiento mucociliar, y se integra en redes de transporte iónico que incluyen ENaC y los intercambiadores SLC26 para mantener el equilibrio electrolítico del epitelio. La alteración del transporte dependiente de CFTR modifica la homeostasis epitelial y la señalización inflamatoria en tejidos como las vías respiratorias, el páncreas y el intestino. La variación genética en CFTR está fuertemente asociada a la fibrosis quística y contribuye a un espectro más amplio de trastornos relacionados con CFTR, lo que lo convierte en una diana central para estudios mecanísticos de la fisiología epitelial y la regulación de canales.

CFTR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CFTR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CFTR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CFTR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CFTR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.