Plasmide CRISPR d'Activation (h) Centriolin: sc-404195-ACT

Le gène humain **CNTRL** code la **centrioline**, une protéine d’échafaudage associée au centrosome et au corps intermédiaire, indispensable à la maturation du centrosome, à l’organisation du fuseau mitotique et à l’étape finale d’abscission lors de la cytocinèse. La centrioline contribue à coordonner l’ancrage des microtubules ainsi que le recrutement de complexes régulateurs qui contrôlent la progression du cycle cellulaire et la ségrégation fidèle des chromosomes. L’altération de l’intégrité du centrosome et de l’achèvement de la cytocinèse peut favoriser l’aneuploïdie et l’instabilité génomique, reliant les voies dépendantes de **CNTRL** à des mécanismes fréquemment étudiés en biologie du cancer. **CNTRL** a également été étudié dans le contexte de défauts du développement liés au centrosome et de phénotypes proches des ciliopathies, en raison d’une architecture centrosomale partagée.

Centriolin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNTRL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Centriolin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNTRL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNTRL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Centriolin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNTRL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Centriolin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Centriolin dans les cellules tumorales présentant une expression de CNTRL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.