Plasmide CRISPR d'Activation (h) CELSR1: sc-405564-ACT

CELSR1 (cadherin EGF LAG récepteur de type G à sept passages 1) code un GPCR d’adhésion atypique qui constitue un composant central de la machinerie de polarité planaire des cellules (PCP). Grâce à des répétitions de cadhérine extracellulaires et à des interfaces de signalisation intracellulaires, CELSR1 coordonne des comportements cellulaires directionnels, l’organisation épithéliale et la dynamique polarisée du cytosquelette au cours du développement et du remodelage tissulaire. Il interagit fonctionnellement avec la signalisation WNT/PCP non canonique et coopère avec des protéines telles que VANGL et FZD pour réguler la division cellulaire orientée et la migration collective. Une activité ou une expression dérégulée de CELSR1 a été associée à des défauts du développement et à une organisation tissulaire aberrante, et l’altération de la signalisation PCP est fréquemment étudiée dans des contextes d’invasion, de morphogenèse et d’intégrité de barrière.

CELSR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CELSR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CELSR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CELSR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CELSR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CELSR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CELSR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CELSR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CELSR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CELSR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.