Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdk5 Double Nickase Plasmid (m): sc-419602-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdk5 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdk5 Double-Nickase-Plasmid (m) und Cdk5 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cdk5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdk5: sc-6247
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdk5 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419602-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk5 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419602-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die murine cyclinabhängige Kinase 5 (Cdk5) ist eine prolin‑gerichtete Serin/Threonin‑Kinase, die durch Assoziation mit nicht‑Cyclin‑Cofaktoren wie p35 (Cdk5r1) und p39 (Cdk5r2) katalytisch aktiv wird. Cdk5 reguliert neuronale Migration, Neuritenauswuchs, die Dynamik synaptischer Vesikel und den Umbau des Zytoskeletts über die Phosphorylierung von Substraten in Mikrotubuli‑ und Aktin‑Netzwerken und greift dabei in MAPK‑Signalwege sowie zellzyklusunabhängige Kinase‑Signalwege ein. Eine dysregulierte Cdk5‑Aktivität wurde mit neurodegenerativen und neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, unter anderem durch veränderte Phosphorylierung von Tau und anderen neuronalen Substraten sowie durch eine beeinträchtigte synaptische Homöostase. Neben der Biologie des Nervensystems trägt die Cdk5‑Signalgebung zu Stressantworten und zur kontextabhängigen Regulation von Adhäsion und Motilität bei und unterstützt damit mechanistische Studien in verschiedenen Zelltypen.
Cdk5 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cdk5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cdk5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cdk5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cdk5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.