Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdc25B: sc-401457-ACT

CDC25B codifica Cdc25B, una fosfatasa de doble especificidad que favorece la progresión del ciclo celular al desfosforilar sitios inhibitorios en CDK1 y otras quinasas dependientes de ciclinas relacionadas, facilitando la transición G2/M. Su actividad se integra con la señalización de puntos de control y las vías de respuesta al estrés, incluida la regulación por ATM/ATR–CHK1/CHK2 y la modulación por proteínas 14-3-3, que influyen en la localización subcelular y en el momento de entrada en mitosis. Mediante la coordinación de los puntos de control de daño en el ADN y el control mitótico, la expresión y la desregulación de CDC25B se examinan con frecuencia en contextos de inestabilidad genómica y proliferación aberrante. Como nodo en los circuitos quinasa–fosfatasa, Cdc25B se estudia ampliamente por sus contribuciones al control del ciclo celular, la adaptación al estrés replicativo y el “crosstalk” entre vías relevante para la biología del cáncer.

Cdc25B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC25B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdc25B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC25B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC25B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdc25B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC25B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdc25B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdc25B en células tumorales con expresión de CDC25B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.