Plasmide Double Nickase (h) Cdc20: sc-400583-NIC

CDC20 code pour Cdc20, un coactivateur central du complexe promoteur de l'anaphase/cyclosome (APC/C), qui coordonne la signalisation du point de contrôle d'assemblage du fuseau mitotique avec la dégradation, médiée par l'ubiquitine, de régulateurs mitotiques clés, notamment la sécurine et la cycline B1. En favorisant le déclenchement en temps opportun de l'anaphase et la sortie de mitose, Cdc20 contribue à maintenir la fidélité de la ségrégation des chromosomes et la stabilité génomique globale. L'activité de CDC20 est régulée par des protéines du point de contrôle telles que MAD2 et BUBR1, ce qui la relie aux voies de surveillance du cycle cellulaire limitant l'aneuploïdie. Une expression dérégulée de CDC20 ou un contrôle défaillant du point de contrôle est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs et à l'instabilité chromosomique observés dans de nombreux contextes de recherche sur le cancer.

Cdc20 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC20. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC20. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC20.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.