CD71/TFRC/Transferrin Receptor Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400310-NIC

TFRC (CD71) codifica o receptor de transferrina, uma glicoproteína de membrana do tipo II que medeia a endocitose dependente de clatrina do ferro ligado à transferrina e sustenta a homeostase de ferro celular. O tráfego e a reciclagem do receptor são acoplados à acidificação endossomal, à liberação de ferro e à coordenação de processos dependentes de ferro, incluindo respiração mitocondrial, síntese de heme e a atividade da ribonucleotídeo redutase para síntese de DNA. A expressão de TFRC é rigidamente regulada pela sinalização elemento responsivo ao ferro/proteína reguladora de ferro (IRE/IRP) e frequentemente se correlaciona com o estado proliferativo devido à maior demanda por ferro. A desregulação do manejo de ferro associado ao TFRC é estudada em contextos como anemia, neurodegeneração, biologia de infecções e metabolismo de células tumorais, nos quais a captação alterada de ferro pode influenciar o estresse oxidativo e programas de crescimento.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TFRC em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TFRC. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TFRC. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TFRC interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.