Plásmido Doble Nickase (h) CD5: sc-402309-NIC

CD5 es una glucoproteína transmembrana de tipo I que se expresa principalmente en los linfocitos T y en un subconjunto de células B, donde actúa como un receptor inmunomodulador que ajusta los umbrales de señalización del receptor de antígeno. Mediante interacciones con componentes del complejo TCR/CD3 y con fosfatasas y adaptadores asociados, CD5 contribuye a la regulación de las cascadas proximales de tirosina quinasas, el flujo de calcio y los programas transcripcionales posteriores que gobiernan la activación, la anergia y la supervivencia. La señalización mediada por CD5 influye en la selección de timocitos y en la tolerancia periférica, moldeando la homeostasis inmunitaria durante las respuestas inflamatorias. La expresión o función desregulada de CD5 se ha vinculado a estados alterados de activación linfocitaria en la autoinmunidad y a redes de señalización aberrantes en neoplasias de células B, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en la investigación inmunológica.

CD5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.