CD39 Double Nickase Plasmid (m): sc-419549-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD39 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD39 Double-Nickase-Plasmid (m) und CD39 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Entpd1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD39 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419549-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD39 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419549-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Entpd1* kodiert CD39 (ENTPD1), eine Ectonukleosid-Triphosphat-Diphosphohydrolase, die extrazelluläres ATP und ADP zu AMP hydrolysiert und dadurch – in Zusammenarbeit mit CD73 – die purinerge Signalübertragung sowie die nachgeschaltete Adenosinproduktion formt. Indem CD39 das Gleichgewicht zwischen proinflammatorischer, ATP-getriebener P2-Rezeptor-Signalisierung und immunregulatorischen Adenosinwegen steuert, beeinflusst es die Aktivierung von Leukozyten, die vaskuläre Homöostase, die Thrombozytenfunktion sowie Gewebereaktionen auf Hypoxie und Verletzung. Die CD39-Aktivität ist besonders auf Endothelzellen und in mehreren Immunzell-Subsets ausgeprägt und verbindet es mit der Regulation von Entzündung, Thrombose und dem Immunmetabolismus im Tumormikromilieu. Eine veränderte Expression oder Funktion von ENTPD1/CD39 wurde mit inflammatorischen und autoimmunen Phänotypen, Ischämie-Reperfusionsreaktionen und krebsassoziierter Immunsuppression in Zusammenhang gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.
CD39 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Entpd1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Entpd1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Entpd1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Entpd1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.