CD137L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404974-ACT

TNFSF9 は、抗原提示細胞に発現する TNF スーパーファミリーのリガンドである CD137L（4-1BBL）をコードしており、活性化 T 細胞および NK 細胞上の CD137/TNFRSF9 と結合して共刺激シグナルを増幅します。CD137L–CD137 相互作用は、NF-κB および MAPK 経路を介して免疫シナプスの成熟、サイトカイン産生、生存プログラムを促進し、細胞傷害応答やメモリー応答の形成に影響を与えます。この軸は、自己免疫、慢性感染、腫瘍免疫などの状況における炎症性微小環境の制御や免疫細胞間クロストークの調節にも関与しており、共刺激の変化がエフェクター機能や疲弊の程度をシフトさせ得ます。さらに、CD137L シグナルは、免疫学・腫瘍学研究モデルに関連する骨髄系細胞の活性化状態や抗原提示ダイナミクスにも影響し得ます。

CD137L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFSF9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD137L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFSF9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFSF9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD137Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFSF9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD137L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFSF9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD137L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。