CCL27 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422842

Panoramica

Ccl27a codifica la chemochina CCL27 (nota anche come CTACK), una chemochina CC associata alla cute che contribuisce a coordinare il traffico leucocitario formando gradienti che guidano le cellule T che esprimono CCR10 verso i siti epiteliali. CCL27 partecipa alla migrazione cellulare guidata da chemochine, alla sorveglianza immunitaria e alla segnalazione infiammatoria nel microambiente cutaneo, influenzando le interazioni tra cheratinociti e linfociti infiltranti. Un’alterata attività dell’asse CCL27–CCR10 è stata collegata a infiammazione cutanea e a un reclutamento modificato delle cellule immunitarie in modelli di processi patologici simili alla dermatite. Nei sistemi murini, Ccl27a è quindi ampiamente studiato per chiarire i meccanismi della chemiotassi selettiva per tessuto e della regolazione immunitaria epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL27 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl27a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl27a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl27a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCL27.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl27a per lo studio della segnalazione di CCL27, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl27a critici per la funzione di CCL27
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl27a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCL27 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CCL27 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl27a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCL27 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CCL27 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl27a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl27a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.