Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL27 (m): sc-422842
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CCL27 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CCL27, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CCL27 Antibody (G-6): sc-390112
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL27 (m) | sc-422842 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ccl27a code la chimiokine CCL27 (également appelée CTACK), une chimiokine CC associée à la peau qui contribue à coordonner le trafic des leucocytes en formant des gradients guidant les cellules T exprimant CCR10 vers les sites épithéliaux. CCL27 participe à la migration cellulaire induite par les chimiokines, à la surveillance immunitaire et à la signalisation inflammatoire au sein du microenvironnement cutané, en influençant les interactions entre les kératinocytes et les lymphocytes infiltrants. Une activité dérégulée de l’axe CCL27–CCR10 a été associée à l’inflammation cutanée et à un recrutement modifié des cellules immunitaires dans des modèles de processus pathologiques de type dermatite. Dans les systèmes murins, Ccl27a est donc largement étudié afin d’analyser les mécanismes de chimiotaxie sélective des tissus et de régulation immunitaire épithéliale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL27 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl27a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl27a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl27a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCL27.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl27a pour l'étude de la signalisation de CCL27, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl27a essentiels à la fonction de CCL27
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl27a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CCL27 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CCL27 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl27a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CCL27 plasmide HDR (m) et le CCL27 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl27a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl27a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.