CCK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419503

Panoramica

Il gene Cck del topo codifica la colecistochinina (CCK), un neuropeptide secreto e un ormone gastrointestinale che regola la sazietà, la secrezione di enzimi digestivi, la contrazione della colecisti e la motilità intestinale tramite l’attivazione dei recettori accoppiati a proteine G CCKAR e CCKBR. Nel sistema nervoso, la CCK agisce come neuromodulatore influenzando la trasmissione sinaptica, la segnalazione degli interneuroni e i circuiti responsivi allo stress, con accoppiamento a valle alla segnalazione fosfolipasi C/Ca²⁺ e alle vie MAPK. L’espressione di Cck collega il rilevamento dei nutrienti alle risposte enteroendocrine e neuronali, sostenendo output metabolici e comportamentali coordinati. Un’alterazione della segnalazione CCK è stata implicata in studi sul comportamento alimentare, la suscettibilità all’obesità, fenotipi simil-ansiosi e modificazioni funzionali gastrointestinali, rendendo Cck un utile bersaglio per ricerche meccanicistiche focalizzate su specifiche vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cck in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cck insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cck a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cck per lo studio della segnalazione di CCK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cck critici per la funzione di CCK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cck per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CCK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cck. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CCK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cck per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cck definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.