Plásmido CRISPR de Activación (h) CCDC23: sc-415702-ACT

SVBP codifica CCDC23, una proteína que contiene un dominio de tipo *coiled-coil* implicada en procesos asociados al centrosoma y en la organización de los microtúbulos, con funciones descritas en la regulación del huso mitótico y la segregación cromosómica. A través de estas funciones, CCDC23 puede influir en la progresión del ciclo celular y en vías de estabilidad genómica que con frecuencia se ven alteradas en contextos de enfermedades proliferativas. La expresión alterada o la desregulación de factores centrosomales y asociados al huso se relaciona comúnmente con aneuploidía y respuestas de estrés celular, lo que hace que SVBP/CCDC23 sea relevante para estudios mecanísticos en biología del cáncer y modelos relacionados. Su localización intracelular y sus características de andamiaje predichas también respaldan su uso como herramienta para explorar redes de interacción proteína-proteína que gobiernan la mitosis y la dinámica del citoesqueleto.

CCDC23 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SVBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CCDC23 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SVBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SVBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CCDC23. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SVBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CCDC23 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CCDC23 en células tumorales con expresión de SVBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.