Plásmido CRISPR de Activación (h) CBX4: sc-403903-ACT

CBX4 (chromobox 4) es una proteína del grupo Polycomb que actúa como lectora epigenética de marcas represivas de histonas y contribuye al silenciamiento transcripcional estable. Como componente asociado a la actividad del complejo represor Polycomb, CBX4 ayuda a regular la compactación de la cromatina, el control del ciclo celular, los programas de diferenciación y el mantenimiento de la identidad celular mediante la represión génica a largo plazo. CBX4 también presenta actividad de ligasa E3 de SUMO, que puede modular la función de factores de transcripción y las respuestas de la cromatina asociadas al daño del ADN. La expresión o actividad desregulada de CBX4 se ha vinculado con proliferación alterada y estados epigenéticos aberrantes observados en la biología del cáncer y en otros trastornos que implican desregulación transcripcional.

CBX4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CBX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CBX4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CBX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CBX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CBX4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CBX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CBX4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CBX4 en células tumorales con expresión de CBX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.