CBP20 Plasmide Double Nickase (h): sc-404124-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CBP20 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CBP20 Double Nickase Plasmid (h) e il CBP20 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NCBP2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CBP20 Antibody (B-1): sc-137123
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CBP20 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBP20 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCBP2 codifica CBP20, la subunità piccola del complesso nucleare di legame al cap, che riconosce il cappuccio di 7-metilguanosina sui trascritti nascenti dell’RNA polimerasi II. Insieme a NCBP1/CBP80, CBP20 collega il riconoscimento del cap alla maturazione co-trascrizionale dell’RNA, inclusi lo splicing del pre-mRNA, la formazione dell’estremità 3′, l’esportazione dell’RNA tramite vie dipendenti da TREX e meccanismi di sorveglianza come la degradazione dell’mRNA mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay). Attraverso questi ruoli, CBP20 contribuisce a coordinare programmi di espressione genica che influenzano il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la segnalazione immunitaria innata legata al metabolismo dell’RNA. La deregolazione della maturazione e dell’esportazione dell’RNA dipendenti dal cap è spesso osservata in stati trascrittomici associati a patologie, rendendo NCBP2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biogenesi dell’RNA e sul trasporto nucleo–citoplasma.
CBP20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NCBP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NCBP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NCBP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NCBP2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.