Plásmido Doble Nickase (h) CBP20: sc-404124-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CBP20 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CBP20 (h) y el plásmido de doble nickasa CBP20 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NCBP2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CBP20 Anticuerpo (B-1): sc-137123
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CBP20 | sc-404124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CBP20 | sc-404124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCBP2 codifica CBP20, la subunidad pequeña del complejo nuclear de unión al capuchón (cap-binding complex), que reconoce el capuchón de 7‑metilguanosina en los transcritos nacientes de la ARN polimerasa II. Junto con NCBP1/CBP80, CBP20 acopla el reconocimiento del capuchón al procesamiento co-transcripcional del ARN, incluyendo el corte y empalme (splicing) del pre-ARNm, la formación del extremo 3′, la exportación de ARN mediante vías dependientes de TREX y mecanismos de vigilancia como la degradación del ARNm mediada por codones de terminación prematuros (NMD). A través de estas funciones, CBP20 ayuda a coordinar programas de expresión génica que influyen en el control del ciclo celular, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata vinculada al metabolismo del ARN. La desregulación del procesamiento y la exportación de ARN dependientes del capuchón se observa con frecuencia en estados transcriptómicos asociados a enfermedad, lo que convierte a NCBP2 en una diana relevante para estudios mecanísticos de la biogénesis del ARN y del transporte núcleo–citoplasma.
CBP20 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCBP2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCBP2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCBP2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCBP2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.