Plásmido Doble Nickase (h) Cbl-3: sc-407624-NIC

CBLC codifica Cbl-3, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que funciona como adaptador para la ubiquitinación y la desregulación endocítica de quinasas de tirosina activadas, tanto receptoras como no receptoras. Mediante su unión dependiente de TKB/SH2 a motivos de fosfotirosina y el reclutamiento de enzimas conjugadoras de ubiquitina, Cbl-3 ayuda a ajustar la amplitud y la duración de la señal en vías vinculadas a la señalización de receptores de factores de crecimiento e inmunitarios, incluidos componentes de las redes MAPK/ERK y PI3K/AKT. La actividad de CBLC contribuye al control del tráfico de receptores, la proteostasis y la regulación por retroalimentación negativa de cascadas de señalización dependientes de fosforilación. La desregulación de las ligasas de ubiquitina de la familia CBL y de sus sustratos se ha asociado con estados alterados de señalización celular relevantes para la transformación oncogénica y perturbaciones de la señalización hematopoyética, lo que convierte a CBLC en un locus útil para estudios mecanísticos de la homeostasis de la señalización.

Cbl-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CBLC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CBLC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CBLC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CBLC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.