casein kinase IIβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401684-ACT

CSNK2B codifica a subunidade regulatória beta da caseína quinase II (CK2), um complexo de quinase de serina/treonina constitutivamente ativo que modula a seletividade por substratos, a estabilidade enzimática e a localização subcelular das subunidades catalíticas. A sinalização mediada por CK2 influencia processos fundamentais, incluindo a progressão do ciclo celular, a resposta a danos no DNA, a apoptose e o controle transcricional, com ampla integração em vias como Wnt/β-catenina, NF-κB e PI3K/AKT. Por meio da fosforilação de numerosos alvos nucleares e citoplasmáticos, CSNK2B contribui para a regulação da cromatina, o processamento de RNA e a proteostase. A atividade desregulada de CK2 e a expressão alterada de CSNK2B têm sido associadas à proliferação aberrante e à sinalização de resposta ao estresse na biologia do câncer, bem como a fenótipos do neurodesenvolvimento, sustentando sua relevância em modelos mecanísticos de doença.

casein kinase IIβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSNK2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

casein kinase IIβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSNK2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSNK2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de casein kinase IIβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSNK2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de casein kinase IIβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via casein kinase IIβ em células tumorais com expressão de CSNK2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.