CASC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411606-ACT

CASC3（別名MLN51）は、スプライシング後にmRNA上へ沈着するエクソンジャンクション複合体（EJC）の中核構成因子をコードし、転写後の遺伝子制御を協調的に担います。CASC3はEIF4A3、MAGOH、RBM8Aなどの因子との相互作用を通じてmRNA監視やナンセンス変異依存的mRNA分解（NMD）に寄与し、転写産物の安定性、核外輸送、翻訳に影響を与えます。これらの機能により、CASC3はRNAの品質管理とプロテオーム恒常性を制御する経路に位置づけられ、細胞増殖や分化などの細胞状態プログラムにも下流で影響を及ぼします。EJC活性やmRNA分解の破綻は、複数の疾患状況で観察される異常な遺伝子発現シグネチャーと関連づけられており、CASC3はRNA生物学研究における機構的ハブとして有用であることを支持します。

CASC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CASC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CASC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CASC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCASC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CASC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCASC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCASC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCASC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCASC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。