CAMK2A/CaMKII alpha Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400228-ACT

CAMK2A codifica a subunidade alfa da proteína quinase II dependente de Ca2+/calmodulina (CaMKIIα), uma quinase de serina/treonina que converte transientes de cálcio intracelular em sinalização dependente de fosforilação. Em neurônios, a CaMKIIα é altamente enriquecida nas densidades pós-sinápticas, onde regula o ciclo de vesículas sinápticas, o tráfego de receptores AMPA e a expressão gênica dependente de atividade que sustenta a plasticidade sináptica, a aprendizagem e a memória. CAMK2A integra sinais a montante oriundos do influxo de Ca2+ mediado por receptores NMDA e interage com programas transcricionais associados a MAPK/ERK e ao CREB. A desregulação da sinalização de CaMKIIα tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, em processos neurodegenerativos e em vias de estresse excitatotóxico, tornando-a um nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos da função neuronal.

CAMK2A/CaMKII alpha O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAMK2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CAMK2A/CaMKII alpha O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAMK2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAMK2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CAMK2A/CaMKII alpha. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAMK2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CAMK2A/CaMKII alpha no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CAMK2A/CaMKII alpha em células tumorais com expressão de CAMK2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.